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人附睾分泌蛋白4-HE4gateioio交易平台简介
发布者: 发布时间:2016/3/23 阅读:53

 

1.预期用途

北京gateio兴生物技术有限公司研究生产的人附睾蛋白4HE4)检测gateioio交易平台(酶联免疫吸附法)用于测定人类血清中的HE4蛋白质含量。

    HE4human epididymis protein 4)是 WFDC2 基因产物,最初发现表达于人附睾上皮[1, 2]Kirchhoff [1]最早从人附睾中克隆获得其全长 cDNA。该基因位于染色体 20q12-13.1,全长 12kb 左右,由 5 个外显子和 4 个内含子组成,有多种剪切方式,编码分泌小分子酸性糖蛋白[3],该蛋白含有高度保守的 WAPWheyAcidic Proteins)结构域,即由 8 个半胱氨酸组成的 4 个二硫键核心区域。WAP 蛋白家族由酸热稳定性良好的小分子量蛋白组成,这些蛋白有蛋白酶抑制剂作用[4],在 WAP 结构域中有一个抑制性的环结构,该环结构可以通过插入到蛋白酶活性结构区从而达到抑制蛋白酶的功能,HE4 虽有类似的结构,但至今未能证实其有蛋白酶抑制功能。

1999 年,Schummer Wang 通过 cDNA 微阵列分析发现 HE4 基因与卵巢癌有密切关系[5, 6]cDNA 微阵列技术表明,HE4 在在卵巢癌组织中高表达,而在正常组织中不表达或低表达[6-9]Hellstrom[10]等比较了卵巢癌患者及正常人血清中的 HE4 蛋白含量,发现大多数卵巢癌患者血清中的 HE4 蛋白量明显增加。Drapkin [11]也报道 HE4 在卵巢癌中高表达,而在肺癌、肝癌、肾癌、甲状腺癌等癌症中未见表达。陈颖[9]等研究了 PTENnm23H1VEGF165Timp2HE4 S100A4 基因在卵巢癌发生和侵袭中的作用,发现 HE4 基因在正常卵巢与卵巢癌组织差异表达最为显著。Laura[12]等评价一组新的肿瘤标志物对卵巢癌的早诊及预后等是否更加敏感和特异,结果相比其他标志物,HE4 在卵巢癌早期和晚期敏感性最高。Moore [13]研究发现,HE4 作为单独检测指标,其敏感性和特异性分别高达 72.9% 95%,是检测早期卵巢癌的最佳标志物。王术艺等[14]考察人 HE4 血清含量在妇科盆腔肿物鉴别诊断中的价值,研究显示血清 HE4 测定是妇科盆腔良恶肿瘤鉴别诊断的良好指标。此外,尚有多项研究显示 HE4 主要在浆液性癌以及子宫上皮样癌中高表达,是目前诊断卵巢癌灵敏性最高的肿瘤标志物[6-18]

基于上述研究,HE4 很有潜力成为卵巢癌早诊的最佳肿瘤标志物之一。因此,研制开发针对 HE4 的高灵敏度、可进行超微量检测的免疫诊断试剂,对于卵巢癌的早期诊断及评价预后均有重要意义。

2.与预期用途相关的临床适应症背景情况

卵巢癌是发生于卵巢组织的常见恶性肿瘤[19],其发病率在三大妇科恶性肿瘤中居第三位,占恶性肿瘤总数的 4%,在普通人群中,发生卵巢癌的风险为 1.4%,而在某些高危妇女中,其风险率更高。近年来卵巢癌的发病率有上升趋势,每年以0.1%的速度增长[20]2009年,美国约有 21,550 名妇女罹患卵巢癌,其中 14,600 名妇女死于该疾病[21]。由于卵巢体积小,位于盆腔深部,卵巢癌早期症状不明显,只是腹部疼痛或膨胀、肠胃消化不良,不易引起足够的重视,导致卵巢癌难以实现早发现,早治疗。研究表明,卵巢癌不同期别患者预后差异很大,期或期的卵巢癌患者 5 年生存率可达 7090%,而且无需术后化疗,但是期的卵巢癌患者 5 年生存率仅为 20%[22],传统的治疗方法包括手术、化学药物治疗及综合治疗等对治愈卵巢癌疗效甚微且容易复发[23]70%80%的卵巢癌患者因不能实现早诊,错过了手术等治疗良机[24-28]。因此,早期确诊对于卵巢癌的治愈率至关重要。此外,良好的诊断指标对卵巢癌患者预后监测也具有重要的指导意义。

然而,目前由于早期诊断方法有限,卵巢癌早期检出率仅为5%B 超及影像学检查不能鉴定卵巢小肿瘤,无法区分良性或恶性肿瘤;穿刺和腹腔镜可能导致穿刺部位肿瘤转移,造成脏器损伤等。

肿瘤标志物是指由肿瘤组织产生的存在于肿瘤组织内,或分泌致血液或其他体液,或因肿瘤组织刺激,由宿主细胞产生而含量高于正常参考值的一类物质,在正常组织或良性疾病中不表达或者仅轻微表达,是肿瘤细胞区别于正常细胞的根本特征,可以提示肿瘤的存在[27]。肿瘤标志物的检测简便且无创,在肿瘤的筛查、诊断、指导治疗、估计预后等方面有着非常广泛的应用前景。肿瘤标志物在肿瘤诊断方面的作用有:(1)早期检测恶性肿瘤;(2)特异性的肿瘤标志物用于不同种类肿瘤的鉴别诊断;(3)可作为判断肿瘤预后和随诊的指标[28]。随着基因组学和蛋白质组学方法逐渐趋于成熟,越来越多肿瘤标志物得到研究和应用。

就卵巢癌而言,目前只有癌抗原 125 (cancer antigen125, CA125) 检测被广泛应用于卵巢癌的临床诊断[29-32]CA125 是胚胎发育过程中体腔上皮表达的一种大分子糖蛋白,是一种肿瘤相关抗原,只要上皮组织产生病变,体内就会产生 CA125,因此上皮组织的癌症一般会使血清中的 CA125 上升。CA125 在大部分卵巢癌患者血清中过量表达,且表达程度与卵巢癌期别呈正性关系[33],但是,CA125 的敏感性很低,有报道称 CA125 期卵巢癌中的阳性率只有33%~50%,并且主要对非粘液性囊腺癌,尤其浆液性囊腺癌敏感,对粘液性肿瘤的检出率相对较低[34, 35]Oliver [36] 132 BRCA120 BRCA2 基因突变的人群、72 例遗传性乳腺癌及卵巢癌家庭成员、88 例遗传性乳腺癌家族中的乳腺癌患者为研究对象,从 1996 1 月至 2002 12 月通过阴道 B 超联合 CA125 进行早期卵巢癌的筛查,证实其无法检测到早期卵巢癌。另外,CA125 在许多其他良性和恶性疾病中也呈现过表达状态,例如早期妊娠,乳腺癌,子宫内膜异位症和腹膜炎,盆腔炎等。所以应用 CA125 诊断卵巢癌并不特异,有时还会导致不必要的手术[37],在美国每年大约10%妇女因卵巢疾病进行手术,但只有少部分妇女属于需要手术治疗的恶性肿瘤[38-40]。一些学者已经进行了 CA125 与其他血清肿瘤标志物以及超声技术联合应用的研究[41, 42],联合应用的肿瘤标志物包括 CA153CA724CA199、脂质结合唾液酸(LASA)VOX1 [43-46]。上述联合应用均以牺牲特异性来提高检测的灵敏度,对卵巢癌的早期诊断意义不大[45, 46]。因此,迫切需要寻找新的、敏感性和特异性更好的肿瘤标志物,用于提高卵巢癌的诊断率。

3.几种肿瘤标志物在卵巢癌检测中的比较

卵巢癌早期临床症状隐匿,70%患者发现时已是期或期,5 年生存率仅有 30%,而早期卵巢癌5 年生存率达 90%47,可见早期诊断可显著提高生存率。肿瘤标记物是反映肿瘤存在的化学类物质,有的不存在于正常成人组织而仅见于胚胎组织,有的在肿瘤组织中的含量大大超过在正常组织里的含量,其存在或量变可提示肿瘤的性质,借以了解肿瘤的组织发生、细胞分化、细胞功能,以帮助肿瘤的诊断、分类、预后判断以及治疗指导。 因此寻找敏感度和特异度均较高的肿瘤标记物有助于卵巢癌的早期诊断,进一步提高生存率,为临床诊治提供参考。

3.1 糖链抗原

糖链抗原 CA125 是一种大分子多聚糖蛋白,存在于卵巢癌细胞表面,正常值为 35 U/mL,是卵巢上皮性癌(EOC)尤其是浆液性癌的首选标记物,其临床应用也最广。 多数卵巢癌患者血清 CA125 在临床症状出现前 4 个月开始升高48Markmann 49发现,血清 CA125 水平与 EOC 患者生存率有关, 认为CA125 是卵巢癌预后指标,当 CA125 水平高于 100U/mL 时预后不良。 研究还发现,血清 CA125 在正常范围内的低水平增加是达到完全缓解(CR)的晚期卵巢癌患者在疾病进展和复发方面的一种较强的独立预测因素50。但是CA125诊断卵巢癌特异度不足,以35 U/mL为临界值,期卵巢癌中仅有约50%患者该指标升高,而 90%期到期卵巢癌患者升高。而且 CA125 在乳腺癌、子宫内膜癌、胃肠道癌和肺癌中也有升高,此外,子宫、肝脏、胃肠道良性病变,卵巢、子宫的良性肿瘤中也伴随 CA125 升高。 因此,CA125 对早期卵巢癌的诊断仍有不足。

3.2 溶血磷脂酸(LPA

LPA 是一种具有细胞间信号传导作用的脂类小分子物质, 已知的人类 LPA 受体有 3 种,LPA1LPA2 LPA3,其中 LPA1 主要分布于正常组织,而LPA2 LPA3 在某些肿瘤组织中明显增多。 LPA 可由恶性卵巢癌上皮细胞产生, 再通过结合和激活G蛋白耦联受体发挥效应,其最显著的作用为刺激细胞增殖、生长及肿瘤细胞的侵袭。 研究发现,LPA 通过和 LPA2 受体结合增加血管内皮生长因子在卵巢癌细胞系的表达,而 LPA2 LPA3 受体在卵巢癌样本中水平明显升高51,推测其可能通过增加血管内皮细胞因子的作用促进肿瘤的发生。 最新研究发现,在卵巢癌细胞株 DOV13 SKOV3 中核因子 κBNF-κB 通路在 LPA 诱导的血管内皮生长因子(VEGF)信号和 EOC 侵袭中发挥重要作用,靶向这一通路可能会成为转移性上皮性卵巢癌治疗的潜在方法52

3.3 人附睾蛋白 4HE4            

HE4 B7 家族成员之一 ,是由位于染色体20q1213.1 HE4 基因(又名 WFDC2)编码,是含有乳清酸型 4 个二硫键核心域(WFDC)的蛋白质,相对分子质量约为 13 000 左右。 HE4 基因通常在人类附睾上皮上表达, 因此认为,HE4 是附睾特异性、生殖相关的蛋白。HE4 蛋白在正常组织中以气管和唾液腺中表达最高53,正常卵巢组织不表达或低表达 HE4 蛋白,卵巢癌组织内 HE4 蛋白高表达。有研究显示,HE4 93%浆液性卵巢癌和100%子宫内膜样卵巢癌中高表达54Jacob 55利用标准酶联免疫吸附试验(ELISA)检测多组不同妇科病变组织和正常组织发现,HE4 的最大优势在于其特异度和其对交界性肿瘤、早期卵巢癌和输卵管癌的诊断优于 CA125,但是并未发现两者在临床应用中的优势。

3.4 NECTIN4

    NECTIN 家族是免疫球蛋白样细胞黏附分子,在形成和维持细胞间黏着接合和紧密连接中起重要作用。所有的 NECTINs 分子具有相似的结构:3 个免疫球蛋白样细胞外环,单次跨膜区域,1个可以和AFADIN 丝状肌动蛋白结合蛋白接合的胞浆域56。目前已报道 4 NECTINNECTIN1 NECTIN2 表达于正常成人组织,NECTIN3 表达于睾丸和胎盘。NECTIN4 通常表达于胎盘, 但是已有文献报道在乳腺导管癌和肺腺癌有表达,Fabre-Lafay 57Takano 等[58]在乳腺癌和肺癌患者细胞中利用金属蛋白酶 ADAM17 NECTIN4 的胞外域从细胞表面解离下来,然后通过ELISA法在血清中检测到NECTIN4 的胞外域结构。 Derycke 59发现,与卵巢正常细胞系和组织相比 NECTIN4 在卵巢癌中过表达,通过 ELISA 法在患者血清中可检测到 NECTIN4胞外域,而那些伴有血清 CA125 升高的良性妇科疾病的患者血清中大部分未检测到 NECTIN4 水平的升高,表明 NECTIN4 可能作为一种标记物与 CA125一起用来区分妇科良性疾病和卵巢癌, 而且 CA125 NECTIN4 联合检测能够增加阳性预测值 82%)和特异度 88%)。 但是和其他肿瘤标记物一样,NECTIN4 不能够检测出所有的卵巢癌患者, 需要进一步探索其他互补的方法提高敏感度。4产品描述

本gateioio交易平台采用双抗体夹心酶联免疫吸附测定法。本gateioio交易平台采用双抗体夹心酶联免疫吸附测定法。包被液中含有两株HE4的单克隆抗体,包被微孔板制成固相抗体,当加入的待测血清样品中含有HE4HE4标准品时,可与微孔板中吸附的抗HE4抗体结合,再加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的另一抗HE4单克隆抗体时,即可与微孔板中第一抗体捕获的HE4结合,经充分洗涤后,加入酶联免疫反应TMB底物,产生的颜色反应与血清样品中的HE4或标准品的含量在一定范围内呈正比。当颜色反应一定时间后,加入终止液以终止颜色反应。在酶标检测仪上,测定450 nm(参考波长630 nm)的光吸收值,可获得标准曲线和待测血清样品中HE4的浓度。

 

 
 

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